ИЗУЧЕНИЕ РАЗНООБРАЗИЯ БАКТЕРИОФАГОВ ЛАКТОКОККОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

В производстве ферментированных молочных продуктов на территории Республики Беларусь чаще других используют молочнокислые бактерии, относящиеся к р. Lactococcus. Непрерывный фаговый мониторинг позволяет ограничить экономические потери от фаголизиса при производстве кисломолочных продуктов, а также снизить риск контаминации готовой продукции патогенной микробиотой. Для этого необходимо выделять, идентифицировать, определять свойства бактериофагов, циркулирующих на предприятиях, принимая во внимание, что на каждом отдельном предприятии присутствуют определенные виды (типы) фагов, что обусловлено ассортиментом выпускаемой продукции, применяемыми видами заквасок и соблюдением санитарно-гигиенических условий. В статье представлены исследования по выделению и характеристике бактериофагов лактококков. Из 51 фагосодержа- щего образца продукции, отобранного на территории Республики Беларусь, выделено 68 бактериофагов. Определен спектр их литической активности. На основании результатов ПЦР с видоспецифичными праймерами 39 бактериофагов отнесены к виду С2. Один бактериофаг по результатам ПЦР идентифицирован как вид Р335. Бактериофагов вида 936 среди выделенных вирусов не выявлено. Проведена дифференциация лактококкофагов вида С2. Проведен подбор рестриктаз, позволяющих различать фаги внутри вида С2. Разработана схема внутривидовой дифференциации бактериофагов лактококков с помощью ПДРФ-анализа. Использование ПДРФ-анализа позволило разделить 39 лактофагов вида С2 на шесть групп. Благодарности. Работа выполнена в рамках исследований по заданию 9.5.50 «Изучение видового разнообразия молочнокислых бактерий, выделенных из природных источников, изменчивости фагов лактококков, выделенных на молокоперерабатывающих предприятиях, в зависимости от сезонности и региональности» ГПНИ «Инновационные технологии в АПК».

1. Кувалдина, Н. Как «обезопасить» молочную продукцию / Н. Кувалдина, Н. Сорокина // Сфера: мир продуктов. – 2005. – № 3. – С. 22–25.

2. Species and type phages of lactococcal bacteriophages / A. W. Jarvis [et al.] // Intervirology. – 1991. – Vol. 32, N 1. – P. 2–9. DOI: 10.1159/000150179

3. Ackermann, H. W. Phage multiplication / H.–W. Ackermann, M. S. DuBow // Viruses of prokaryotes / H. W. Ackermann, M. S. DuBow. – Boca Raton, 1987. – Vol. 1 : General Properties of Bacteriophages. – Р. 49–85.

4. Основы бактериофагии : учеб. пособие / под общ. ред. И. М. Габриловича. – Изд. 2-е. – Минск : Выш. шк., 1973. – 224 с.

5. Сельсков, А. Н. Биологическая характеристика и классификация бактериофагов молочнокислых стрептококков : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.00.07 / А. Н. Сельсков ; Акад. наук БССР, Ин-т микробиологии. – Минск, 1979. – 22 с.

6. Hammes, W. P. The Genera Lactobacillus and Carnobacterium / W. P. Hammes, N. Weiss, W. Holzapfel // The Prokaryotes : a handbook on the biology of bacteria: ecophysiology, isolation, identification, applications / ed.: A. Balows [et al.]. – Heidelberg, 1992. – Vol. 2. – P. 1535–1594.

7. Cluzel, P.–J. Interactions of Lactobacillus bulgaricus temperature bacteriophage 0448 with host strains / P.–J. Cluzel, J. Serio, J.–P. Accolas // Appl. a. Environmental Microbiology. – 1987. – Vol. 53, N 8. – P. 1850–1854.

8. Гудков, А. В. Сыроделие: технологические, биологические и физико-химические аспекты / А. В. Гудков ; под ред. С. А. Гудкова. – М. : ДеЛи принт, 2003. – 799 с.

9. Bacteriophages of the genus Lactobacillus / T. Sozzi [et al.] // Intervirology. – 1981. – Vol. 16, N 3. – Р. 129–135. DOI: 10.1159/000149259

10. Состояние фагового фона на отечественных молочных предприятиях / В. И. Ганина [и др.] // Молоч. пром-сть. – 2005. – № 10. – С. 20–21.

11. Скотт, Р. Производство сыра: научные основы и технологии / Р. Скотт, Р. К. Робинсон, Р. А. Уилби ; пер. с англ. 3-го изд. ; под общ. ред. К. К. Горбатовой. – СПб. : Профессия, 2005. – 460 с. DOI: 10.1007/978-1-4615-5819-4

12. Brussow, H. Phages of dairy bacteria / H. Brussow // Annu. Rev. of Microbiology. – 2001. – Vol. 55. – Р. 283–303. DOI: 10.1146/annurev.micro.55.1.283

13. Снятковский, М. В. Бактериофаги в молочном производстве и борьба с ними / М. В. Снятковский, Р. З. Карычев, Г. П. Шаманова // Перераб. молока. – 2006. – № 5. – С. 20–21.

14. Characterization of lactococcal bacteriophages from Quebec cheese plants / S. Moineau [et al.] // Canad. J. of Microbiology. – 1992. – Vol. 38, N 9. – P. 875–882.DOI: 10.1139/m92-143

15. Biodiversity and classification of lactococcal phages / H. Deveau [et al.] // Appl. a. Environmental Microbiology. – 2006. – Vol. 72, N 6. – P. 4338–4346. DOI: 10.1128/aem.02517-05

16. Isolation and characterization of lactococcal bacteriophages from cultured buttermilk plants in the United States / S. Moineau [et al.] // J. of Dairy Science. – 1996. – Vol. 79, N 12. – P. 2104–2111. DOI: 10.3168/jds.s0022-0302(96)76584-0

17. Фенотипическая характеристика лактофагов молочных продуктов / А. Райский [и др.] // Наука и инновации. – 2008. – № 4. – С. 36–40.

18. Коллекция бактериофагов и индикаторных культур молочнокислых бактерий / Н. Фурик [и др.] // Наука и инновации. – 2008. – № 1. – С. 31–33.

19. Raiski, A. Biodiversity of Lactococcus lactis bacteriophages in the Republic of Belarus / A. Raiski, N. Belyasova // Intern. J. of Food Microbiology. – 2009. – Vol. 130, N 1. – P. 1–5. DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2008.12.024

20. Райский, А. П. Биоразнообразие и идентификация распространенных на молочных комбинатах Беларуси лактофагов / А. П. Райский, С. Н. Шпилевский, Н. А. Белясова // Тр. БГТУ. Сер. IV, Химия и технология орган. веществ. – 2008. – Вып. 16. – С. 166–168.

21. Biodiversity of Lactococcus lactis bacteriophages in Polish dairy environment / A. K. Szczepańska [et al.] // Acta Biochimica Polonica. – 2007. – Vol. 54, N 1. – Р. 151–158.

22. De Man, J. C. A medium for the cultivation of lactobacilli / J. C. de Man, M. Rogosa, M. E. Sharpe // J. of Appl. Bacteriology. – 1960. – Vol. 23, N 1. – Р. 130–135. DOI: 10.1111/j.1365-2672.1960.tb00188.x

23. Brody, J. R. Sodium boric acid: a Tris-free, cooler conductive medium for DNA electrophoresis / J. R. Brody, S. E. Kern // BioTechniques. – 2004. – Vol. 36, N 2. – P. 214–216.

24. Казак, А. Н. Изучение распространенности бактериофагов в ферментированных молочных продуктах / А. Н. Казак, С. Л. Василенко, Н. Н. Фурик // Актуальные вопросы переработки мясного и молочного сырья : сб. науч. тр. / Науч.-практ. центр Нац. акад. наук Беларуси по продовольствию, Ин-т мясо-молоч. пром-сти ; редкол.: А. В. Мелещеня [и др.]. – Минск, 2014. – Вып. 8. – С. 117–129.

25. Pillidge, C. J. DNA restriction maps and classification of the lactococcal bacteriophages c2 and sk1 / C. J. Pillidge, A. W. Jarvis // New Zealand J. of Dairy Science a. Technology. – 1988. – Vol. 23. – P. 411–416.

26. Sequencing and analysis of the prolate-headed lactococcal bacteriophage c2 genome and identification of the structural genes / M. W. Lubbers [et al.] // Appl. а. Environmental Microbiology. – 1995. – Vol. 61, N 12. – P. 4348–4356.

27. Transcription analysis of the prolate-headed lactococcal bacteriophage c2 / M. W. Lubbers [et al.] // J. of Bacteriology. – 1998. – Vol. 180, N 17. – P. 4487–4496.

28. Schouler, C. Sequence and organization of the lactococcal prolate-headed bIL67 phage genome / C. Schouler, S. D. Ehrlich, M. C. Chopin // Microbiology. – 1994. – Vol. 140, N 11. – P. 3061–3069. DOI: 10.1099/13500872-140-11-3061

29. Ackermann, H. W. Curated list of prokaryote viruses with fully sequenced genomes / H. W. Ackermann, A. M. Kropinski // Research in Microbiology. – 2007. – Vol. 158,N 7. – P. 555–566. DOI: 10.1016/j.resmic.2007.07.006

30. Labrie, S. Multiplex PCR for detection and identification of lactococcal bacteriophages / S. Labrie, S. Moineau // Appl. a. Environmental Microbiology. – 2000. – Vol. 66, N 3. – P. 987–994. DOI: 10.1128/aem.66.3.987-994.2000

31. Multiplex PCR for the detection and identification of dairy bacteriophages in milk / B. del Rio [et al.] // Food Microbiology. – 2007. – Vol. 24, N 1. – P. 75–81. DOI: 10.1016/j.fm.2006.03.001