Аллергическая активность и специфичность препаратов туберкулина с 30–50 % слабосекретирующихся антигенов микобактерий туберкулеза

Туберкулёз крупного рогатого скота остается глобальной мировой проблемой. Внутрикожная проба с туберкулином – основной метод определения статуса стад, что предъявляет особые требования к активности и специфичности диагностикума. Основу современных туберкулинов составляют антигены микобактерий туберкулёза, которые легко секретируются в жидкую синтетическую среду в процессе роста, но целый ряд антигенов с низким показателем секретируемости находится в составе туберкулинов в незначительных количествах. Цель работы – получение слабосекретирующихся антигенов из отхода производства – автоклавированной бактериальной массы производственного штамма микобактерий туберкулёза (МБТ) с использованием ультразвука и неионного детергента, исследование диагностических свойств туберкулина с 30–50 % таких антигенов. Установлено, что автоклавированная бактериальная масса производственного штамма МБТ, являющаяся отходом производства туберкулина, может быть дополнительным источником туберкулопротеинов, представляющих собой слабосекретирующиеся (СС) антигены МБТ, которые в эквивалентной дозе примерно на 30 % активнее, чем стандартный туберкулин на основе легкосекретирующихся антигенов, и не уступает ему по видовой специфичности. При этом в состав туберкулина можно включать до 50 % очищенных СС туберкулопротеинов из бактериальной массы. Получаемый препарат не реактогенен, в эквивалентной дозе не отличается по активности от международного стандарта ППД туберкулина, но превосходит его по видовой специфичности. Показано, что в стадах с неопределённым статусом по туберкулёзу на туберкулины с 30–50 % очищенных СС туберкулопротеинов реагирует в 2,2 раза больше коров, чем на стандартные препараты на основе легкосекретирующихся антигенов микобактерий туберкулёза. Углубленные исследования реагировавших коров с применением методов детекции генома микобактерий туберкулёза и бактериологических маркеров туберкулёзной инфекции подтвердили наличие у них латентной туберкулёзной инфекции. Включение в состав туберкулина до 50 % туберкулопротеинов из бактериальной массы повышает диагностические свойства целевого продукта и существенно снижает его себестоимость.

туберкулёз крупного рогатого скота, антигены, туберкулин, автоклавированная бактериальная масса производственного штамма микобактерий туберкулёза, ультразвук, неионный детергенат, диагностические свойства туберкулина со слабосекретирующимися антигенами микобактерий туберкулёза

1. Terrestrial animal health code / World Organisation for Animal Health. – 28th ed. – Paris : OIE, 2019. – 2 vol.

2. The tuberculin test / M. L. [et al.] // Veterinary Microbiology. – 1994. – Vol. 40, N 1. –2. – P. 111–124. https://doi. org/10.1016/0378-1135(94)90050-7

3. Cousins, D. V. Mycobacterium bovis infection and control in domestic livestock / D. V. Cousins // Rev. Sci. et Techn. de l’OIE. – 2001. – Vol. 20, N 1. – P. 71–85. https://doi.org/10.20506/rst.20.1.1263

4. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals 2012: OIE Terrestrial manual 2012 / World Organisation for Animal Health. – 7th ed. – Paris, 2012. – 2 vol.

5. Seibert, F. B. Tuberculin purified protein derivative: preparation and analyses of a large quantity for standard / F. B. Seibert, J. T. Glenn // Amer. Rev. of Tuberculosis. – 1941. – Vol. 44, N 1. – P. 9–25.

6. Pemberton, J. R. Chemical, physical, and immunological characteristics of purified protein derivatives from Mycobacterium bovis : dissertations / J. R. Pemberton ; Iowa State Univ. – Ames, Iowa, 1971. – 115 p. https://doi.org/10.31274/ rtd-180813-2247

7. Получение высокоактивного и специфичного аллергена для массовой диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с помощью ультрафильтрации / А. П. Лысенко [и др.] // Ветеринар. медицина Беларуси. – 2001. – № 4–№ 1. – 2002. – С. 12–14.

8. Лысенко, А. П. Антигенный состав ППД туберкулина для млекопитающих / А. П. Лысенко // Ветеринария. – 1989. – № 5. – С. 30–32.

9. Honda, J. R. Global environmental nontuberculous mycobacteria and their contemporaneous man-made and natural niches / J. R. Honda, R. Virdi, E. D. Chan // Frontiers in Microbiology. – 2018. – Vol. 9. – Art. 2029. https://doi.org/10.3389/ fmicb.2018.02029

10. Шаров, А. Н. Аллергическая диагностика туберкулеза у животных и повышение ее эффективности : автореф. дис. … д-ра ветеринар. наук : 16.00.03 / А. Н. Шаров. – М., 1989. – 37 с.

11. Выявление больного туберкулезом крупного рогатого скота в состоянии анергии к туберкулину / А. Х. Найманов [и др.] // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. – 2019. – № 1. – С. 17–21. https://doi.org/10.26155/vet.zoo.bio.201901003

12. Козлов, В. Е. Аллергены для диагностики туберкулеза: совершенствование производства и стандартизация : автореф. дис. ... д-ра биол. наук : 03.00.23, 16.00.03 / В. Е. Козлов ; Центр качества и стандартизации лекарств. средств для животных и кормов. – М., 2007. – 43 с.

13. Characterization of fibronectin-binding antigens released by Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis BCG / C. Abou-Zeid [et al.] // Infection a. Immunity. – 1988. – Vol. 56, N 12. – P. 3046–3051. https://doi.org/10.1128/IAI.56.12.3046-3051.1988

14. Wiker, H. A localization index for distinction between extracellular and intracellular antigens of Mycobacterium tuberculosis / H. Wiker, M. Harboe, S. Nagai // J. of General Microbiology. – 1991. – Vol. 137, N 4. – P. 875–884. https://doi.org/10.1099/00221287-137-4-8751991

15. MPB70 and MPB83 as indicators of protein localization in mycobacterial cells / M. Harboe [et al.] // Infection a. Immunity. – 1998. – Vol. 66, N 1. – P. 289–296. https://doi.org/10.1128/iai.66.1.289-296.1998

16. Olds, G. R. Characterization of Mycobacterium tuberculosis antigen 5 epitopes by using a panel of 19 monoclonal antibodies / G. R. Olds, A. J. Sanson, T. M. Daniel // J. of Clinical Microbiology. – 1987. – Vol. 25, N 3. – P. 471–475. https:// doi.org/10.1128/jcm.25.3.471-475.1987

17. Wiker, H. G. MPB 70 and MPB 83 – major antigens of Mycobacterium bovis / H. G. Wiker // Scand. J. of Immunology. – 2009. – Vol. 69, N 6. – P. 492–499. https://doi.org/10.1111/j.1365-3083.2009.02256.x

18. Hall, M. R. Preparation of biologically active components of Mycobacterium bovis using Triton X-100 or potassium chloride / M. R. Hall, C. O. Thoen // Amer. J. of Veterinary Research. – 1983. – Vol. 44, N 8. – P. 1602–1604.

19. Оценка эффективности термического обеззараживания молока туберкулинпозитивных коров с использованием методов детекции CWD форм микобактерий туберкулеза / А. П. Лысенко [и др.] // Экология и живот. мир. – 2017. – № 1. – С. 41–47.

20. Феномен изменчивости микобактерий туберкулеза и его использование для обнаружения туберкулезной инфекции / А. П. Лысенко [и др.] // Туберкулез – глобальная катастрофа человечества: эпидемиологические, клинико-диагностические, медико-социальные и организационно-правовые аспекты противотуберкулезной помощи в странах СНГ : материалы I Междунар. заоч. науч.-практ. конф., 24 марта 2014 г. / Центр. науч.-исслед. ин-т туберкулеза, Рост. гос. мед. ун-т. – Ростов н/Д, 2014. – С. 176–198.

21. Вирус бычьего лейкоза – вирусоподобная форма микобактерий туберкулеза? / А. П. Лысенко [и др.] // Экология и живот. мир. – 2019. – № 1. – С. 15–24.

22. Cwd tuberculosis found in spongiform fisease formerly attributed to prions: its implication towards mad cow disease, scrapie and Alzheimer’S / A. P. Lysenko [et al.] // J. of MPE Molecular Pathological Epidemiology. – 2017. – Vol. 3, N 3:3. – P. 1–13. https://doi.org/10.5281/zenodo.894183

23. Микобактерии туберкулеза после летального воздействия дезинфектантов могут восстанавливать жизнеспособность в виде микобактерий с дефектной клеточной стенкой / А. Э. Высоцкий [и др.] // Эпизоотология. Иммунобиология. Фармакология. Санитария. – 2019. – № 2. – С. 26–35.